La technique ELISA est une technique immuno-enzymatique. Elle est couramment utilisée au laboratoire d’analyse pour quantifier une molécule en solution. Sa mise en œuvre nécessite plusieurs étapes :

  • La sensibilisation : elle permet de fixer les antigènes ou les anticorps sur le support. 
  • La saturation : elle permet de combler les sites non spécifiques. 
  • Les lavages : ils permettent d’éliminer tout ce qui n’est pas fixé.
  • Les dépôts de la gamme et des échantillons : ils permettent de mettre en contact les antigènes avec les anticorps. 
  • La réaction enzymatique : l’enzyme est couplée de manière covalente à une molécule souvent un anticorps. On parle de conjugués. La réaction enzymatique est stoppée par une solution dénaturante qui est généralement une solution basique. 
  • L’étape de révélation : la coloration est mise en évidence par le pH du milieu. L’absorbance est mesurée par spectrophotométrie. 

Il existe différents types de techniques ELISA : direct indirect, compétitif et sandwich, etc.

Divers témoins sont nécessaires en immuno-enzymologie :

  • Témoin substrat : il permet de vérifier que le substrat ne s’hydrolyse pas en absence d’enzymes. Il est composé de tout sauf de l’enzyme. 
  • Témoin conjugué : il permet de vérifier que le conjugué se fixe sur la molécule qui lui est complémentaire. Il est composé de tout sauf de la molécule sur laquelle doit se fixer le conjugué.